Elisa小課堂：ELISA試劑盒酶聯免疫吸附測定類型及操作過程

　　ELISA試劑盒雙抗體夾心法檢查抗原

　　雙抗體夾心法是檢查抗原zui常用的辦法，但要留意的是在一步法(待測抗原與酶標抗體一同參加反響)測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體，而不再構成“夾心復合物"呈現鉤狀效應，乃至可不顯色而呈現假陰性成果。因而在使用一步法試劑測定標本中含量可反常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時，應留意可測規模的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。 雙抗體夾心法測抗原的另一留意點是類風濕因子(RF)的攪擾。RF是一種本身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段。用作雙抗體夾心法檢查的血清標本中如富含RF，它可充任抗原成份，一同與固相抗體和酶標抗體，表現出假陽性反響。雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能構成兩位點夾心。

　　雙抗體夾心法的扼要操作過程為：

　　1)先參加抗體，使抗體固定于載體外表;

　　2)再加樣品，使目標檢查抗原構成抗原-抗體復合物;

　　3)加酶標抗抗體(第二種動物抗抗原的酶標抗體);

　　4)參加酶促反響底物，發作顯色反響，顯色的深淺與待測抗原的量成正比。

　　ELISA試劑盒競賽法檢查抗原

　　當小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的抗體位點，因而不能用雙抗體夾心法進行測定，能夠選用競賽法形式。辦法的基本原理可見圖2，經洗刷后分成兩組：一組加酶符號抗原和被測抗原的混合液，而另一組只加酶符號抗原，再經孵育洗刷后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的不知道抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

　　競賽法的扼要操作過程：

　　1)先參加抗體，使抗體固定于載體外表;

　　2)參加梯度濃度比例的待測樣品與酶標抗原混合物,一同做只加酶標抗原的對照組;

　　3)參加酶促反響底物，發作顯色反響，比照實驗組及對照組的顯色區別，計算不知道抗原的量。

　　雙抗原夾心法檢查抗體

　　雙抗原夾心法的反響形式與雙抗體夾心法相似。用特異性抗原進行包被和制備酶物，以檢查相應的抗體。與間接法測抗體的不一樣之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因而其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢查常選用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備，應根據抗原構造的不一樣，尋覓適宜的符號辦法。

　　雙抗原夾心法的扼要操作過程為：

　　1)先參加抗原，使抗體固定于載體外表;

　　2)再加樣品，使目標檢查抗體構成抗原-抗體復合物;

　　3)加酶標抗原;

　　4)參加酶促反響底物，發作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

　　間接法檢查抗體

　　間接法是檢查抗體常用的辦法。其原理為使用酶符號的抗抗體(辣根過氧化物酶符號的兔抗人免疫球蛋白抗體)以檢查與固相抗原的受檢抗體(人免疫球蛋白)，故稱為間接法。本法主要用于對病原體抗體的檢查而進行流行癥的確診。間接法的長處是只需改換包被抗原就可使用同一酶標抗抗體樹立檢查相應抗體的辦法。

　　間接法的扼要操作過程：

　　1)將特異性抗原與固相載體聯合，構成固相抗原;

　　2)加稀釋的受檢血清，保溫反響。血清中的特異抗體與固相抗原，構成固相抗原抗-體復合物;3)加酶標抗抗體;

　　4)參加酶促反響底物，發作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

　　ELISA試劑盒競賽法檢查抗體

　　競賽法測抗體的反響形式與競賽法測抗原相似。用特異性抗原進行包被和制備酶物，以檢查相應的抗體。當抗原材料中的攪擾物質不易除去，或不易得到滿足的純化抗原時，可用此法檢查特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競賽與固相抗原。標本中抗體量越多，在固相上的酶標抗體愈少，因而陽性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。競賽法測抗體有多種形式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競賽，抗HBc ELISA通常選用此法。另一種形式為將標本與抗原一同參加到固相抗體中進行競賽，洗刷后再參加酶標抗體，與在固相上的抗原反響。抗HBe的檢查通常選用此法。

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